A LAMP- (hurok által közvetített izotermikus sokszorosítás) technika tesztelése kutyák szívférgességének (Dirofilaria immitis) kimutatására

Abstract

ÖSSZEFOGLALÁS A kutyák szívférgességének kimutatására számos hagyományos és újabb diagnosztikai módszer létezik. Ilyen többek között az izotermális LAMP-módszer, amelyet számos más fertőző betegség kimutatására használnak világszerte. A szerzők vizsgálataik során kutyavérből kivont DNS-mintákon (n = 30) tesztelték ennek a technikának az alkalmazhatóságát, összehasonlítva a real-time PCR módszer eredményeivel. Vizsgálataik alapján a LAMP technika a jövőben gyors, egyszerű és mobilis alternatívát kínálhat az állatorvosi diagnosztika ezen területén is, bár a módszer érzékenységét fokozni szükséges a megbízható kimutatás érdekében. SUMMARY Background: Canine heartworm disease, caused by the mosquito-transmitted filarial nematode Dirofilaria immitis, poses significant health risks to dogs. Once restricted to tropical regions, the disease has emerged in temperate zones, with endemic areas identified in Hungary. The parasite’s life cycle, involving adult worms residing in pulmonary arteries and microfilariae circulating in the bloodstream, can lead to severe cardiopulmonary damage, underscoring the need for early and accurate diagnosis. Objectives: This study aimed to evaluate a LAMP-based diagnostic assay for the rapid detection of D. immitis in DNA samples extracted from canine blood and to compare its performance with real-time PCR. Materials and Methods: Thirty DNA isolates extracted from EDTA-anticoagulated blood samples, collected between 2022 and 2023, were pre-screened by real-time PCR. Our LAMP reaction employed a previously described primer set in a 5 μl mixture containing an isothermal master mix, specific primers, betaine, and template DNA. Reactions were incubated at 65°C for 40 minutes, and amplification was detected via endpoint analysis using GelRed TM staining under blue light. Results and Discussion: The LAMP assay yielded positive results for samples with real-time PCR Ct values below 30 and negative outcomes for PCR-negative samples, with no false positives observed. The entire procedure was completed within 45 minutes. The clear correlation between low Ct values and LAMP positivity emphasizes the method’s diagnostic reliability. However, further studies are required to assess better sensitivity in samples with higher Ct values and to validate the assay in larger cohorts. Overall, the findings support LAMP as a promising, rapid and cost-effective alternative for diagnosing canine heartworm disease in the future.