A T-2 toxin sejtkárosító hatásainak befolyásolása epoxid-hidroláz enzim segítségével csirke májsejttenyészeten

Abstract

A mikotoxinok mikroszkópikus gombafajok biológiai hatással rendelkező másodlagos anyagcseretermékei. Közülük számos toxin súlyos köz- és állategészségügyi kockázatot jelent. A T-2 toxin a trichotecénvázas mikotoxinok közé tartozik, melyet a szántóföldi penészgombákhoz sorolható Fusarium-fajok termelnek. A toxin hatással van az anyagcsere-folyamatokban központi szerepet betöltő májra, a molekuláris szinten történő változások azonban nem teljesen tisztázottak. Sejtkárosító hatását főképp az általa generált oxidatív stressz és immunmoduláló hatása révén fejti ki. A T-2 toxin lebontásában fontos szerepet játszanak a bakteriális epoxid-hidrolázok (EH). Kísérletünk során a toxin hatásainak vizsgálatán kívül arra kerestük a választ, hogy milyen módon befolyásolja ezen enzim exogén módon történő alkalmazása az általunk kialakított csirke eredetű primer májsejtmodellt, így alkalmazható alternatívát jelenthet-e a T-2 toxin elleni védekezés területén. Kísérletünkben a kutatócsoportunk által kidolgozott sejtizolálási módszer alapján primer hepatocita tenyészeteket hoztunk létre Ross-308 fajtájú brojlercsirkékből, melyeken a T-2 toxin és a Rhodococcus rhodochrous baktérium által termelt EH sejtszintű hatásait kívántuk vizsgálni. Ennek érdekében a sejttenyészeteket 0, 10, 100 és 1000 nmol/l koncentrációjú T-2 toxint tartalmazó tápfolyadékkal kezeltük 24 órás inkubációs időt alkalmazva, mely elrendezésen belül az enzim hatásainak vizsgálata céljából EH-zal kezelt (2 mg/ml tápfolyadék) és nem kezelt csoportokat alakítottunk ki. A sejtek metabolikus aktivitását CCK-8 teszt segítségével követtük nyomon, illetve Amplex Red módszerrel határoztuk meg a tenyészetek H2O2 termelését. Csirke specifikus ELISA tesztekkel vizsgáltuk továbbá a sejtek által termelt interleukin-6 (IL-6) és IL-8 koncentrációját.