Szelektív TMPRSS2 gátlószer in vitro farmakológiai jellemzése

Abstract

A TMPRSS2 egy olyan membránhoz kötött szerin proteáz enzim, amely szerepet játszik az influenzavírusos megbetegedésekben és egyes daganatok esetén a metasztázis képződés folyamatában. Célunk egy szintetikus 3-amidinofenilalanin alapvázú szelektív TMPRSS2 inhibitor, az I-432-es gátlószer és a bélhám interakciójának jellemzése, valamint az inhibitor in vitro hatékonyságának meghatározása a metasztázis képződés gátlásában. Kísérletünk során az I-432 hatásmódját nem tumorosan transzformált, membrán inzerten tenyésztett sertés jejunális eredetű IPEC-J2 sejteken vizsgáltuk. Az I-432 inhibitor sejtekre gyakorolt toxikus hatását Neutral Red módszerrel határoztuk meg. A TMPRSS2 expresszióját immunfluoreszcens festéssel és Western blot módszerrel vizsgáltuk. A TMPRSS2 proteáz aktivitását fluorogén szubsztrát hozzáadásával, fluoriméterrel mértük. Az IPEC-J2 sejtekben termelődő hidrogén-peroxid mérését Amplex red módszerrel végeztük el. A metasztázis gátlás hatékonyságának megítéléséhez transzmigrációs kísérletet végeztünk, amelyhez áttétes humán emlőkarcinóma sejtvonalat, MDA-MB-231 sejteket alkalmaztunk, melyeket hCMEC/D3 humán agyi endothelsejtekre helyeztünk és a tendencia változását mértük.