A PRRSV kimutatása RNS alapú in situ hibridizációval

Abstract

A sertések reprodukciós és légzőszervi szindrómája egyike a legnagyobb gazdasági kárt okozó megbetegedéseknek, amelyek a modern sertéstartást érintik. A kórkép világszerte elterjedt, a nagy sertéstartó államoknak jelentős többletköltséget okozva. A betegség kórokozója a Nidovirales rend Arteriviridae családjának Porarterivirus nemzetségbe tartozó PRRS-vírus 1 (PRRSV-1), valamint PRRS-vírus 2 (PRRSV-2). A vírust rendkívüli változékonyság jellemzi, amely nagyban befolyásolja a kórokozó elleni védekezés hatékonyságát, a betegség járványtanát, illetve immunbiológiáját. A PRRSV által okozott klinikai tünetek a különböző korcsoportokban jelentősen eltérnek. Kocák esetében a reprodukciós zavarok a legfontosabbak, úgymint a koraellés, a halvaszületés, valamint a kései visszaivarzás. A kórokozóval fertőzött újszülött malacok vitalitása igen lecsökkent, így az újszülöttkori mortalitás jelentősen megnő, ezen kívül bizonyos légzőszervi tünetek is megjelenhetnek. A növendék, illetve hízó korcsoportokban a súlyos formában megjelenő légzőszervi tünetek (nehezített légzés, köhögés) kerülnek előtérbe, amelynek következtében pneumonia is kialakulhat. A betegség következtében megjelenő tünetek súlyosságát nagyban befolyásolja az adott vírustörzs virulenciája, valamint a fertőzött egyedek immunbiológiai állapota. Kutatásunk során 20, kísérleti körülmények közt vad típusú, PRRSV-1-gyel fertőzött sertés bal középső tüdőlebenyéből formalin-fixáltuk és paraffinba ágyaztuk (FFPE), majd ezen blokkokból készített metszeteket vizsgáltuk. A mintákból a sertések reprodukciós és légzőszervi szindrómájának vírusát egy újszerű, RNS-alapú in situ hibridizációs módszerrel, RNAscope eljárással mutattuk ki. A reakcióhoz alkalmazott próbákat a kísérletben alkalmazott vírustörzs szekvenciája alapján készíttettük el. A vírus jelenlétét intenzív piros jellel azonosítottuk.