Különböző Mycoplasma gallisepticum törzsek összehasonlító vizsgálata több, döntően PCR alapú molekuláris biológiai módszer segítségével

Abstract

Munkánk során 12 különböző eredetű, virulenciájú és eltérő biológiai tulajdonsággal rendelkező Mycoplasma gallisepticum (MG) törzset, valamint a M. imitans 4229 (MI) törzset vizsgáltunk. A különböző országokból származó vad MG törzsek mellett két, napjainkban élő vakcinaként használt törzset (MG F és MG TS-11 vakcina törzsek) is tanulmányoztunk. A munka első lépéseként a Mycoplasma-törzsek teljes genomját vizsgáltuk két különböző RAPD-PCR rendszer segítségével. Ezzel a módszerrel a vizsgált törzsek között (beleértve a MI-t és a vakcina törzseket is) különbségek mutatkoztak. A munka további részében az irodalmi adatok alapján a Mycoplasmák patogenitásában feltételezetten szerepet játszó nyolc gén tulajdonságát vizsgáltuk. A vizsgált génekre több PCR módszert fejlesztettünk ki oly módon, hogy a keletkezett amplikonok a vizsgált gén egészét lefedjék. Így egy gén esetében 4-5 szakaszt amplifikáltunk. Az amplikonok mindegyikét emellett restrikciós emésztésnek vetettük alá, legalább 2 restrikciós enzimet alkalmazva. A gének vizsgálata során továbbá irodalmi primereket is alkalmaztunk. A gének PCR-RFLP vizsgálatát követően a MI a többi vizsgált MG törzstől egyértelműen megkülönböztethető volt. Ugyanakkor a MG F és TS-11 vakcinatörzsek és a többi vizsgált Mycoplasma-törzs között is jelentkeztek különbségek. Egyes gének változékonyabbnak mutatkoztak, mint mások, ugyanakkor egy génen belül is találhatók variábilisabb és kevésbé variábilis szekvenciák. A munka eredményeképpen a vizsgált Mycoplasma-törzsek egymástól megkülönböztethetőek voltak.