A máj, a bendő- és a vékonybél-nyálkahártya xenobiotikum-biotranszformációs folyamatainak összehasonlító vizsgálata szarvasmarhában
Absztrakt
A xenobiotikumok lebontásában meghatározó szerepű citokróm P450 (CYP) enzimek működéséről kérődzőkben eddig viszonylag kevés irodalmi adat állt rendelkezésünkre, különös tekintettel az extrahepatikus szövetekre. Korábban már számos állatfaj esetében nem csak májban, hanem a vékonybél nyálkahártyájában is igazolták ezen enzimek jelenlétét, azonban kérődzők bendőfalából eddig csak egyes CYP alcsaládok kerültek kimutatásra mRNS szinten. A szájon át felvett xenobiotikumokból a bendőben zajló mikrobiális fermentáció révén különféle metabolitok keletkezhetnek, melyek anyagcseréjében a CYP enzimeknek, mint elsődleges metabolikus barriernek, fontos szerepe lehet. Kutatásaink során szarvasmarha eredetű hepatikus és extrahepatikus szövetekben vizsgáltuk a CYP1A2 és CYP2C9 izoenzimek aktivitását.
A mintákat Aberdeen Angus húshasznú szarvasmarhákból származó bendőpapillákból, a duodenum nyálkahártyájából, továbbá a máj processus caudatusából vettük (n=22), a Mikofami Kft. zalaszentiváni vágóhídján. A foszfátpufferben történő homogenizálást követően, kétlépcsős centrifugálással izoláltuk a posztmiktokondriális felülúszót (ún. S9 frakciót), melyből a CYP1A2 és CYP2C9 enzimek aktivitását luminometriás módszerrel, CYP-Glo Kitek segítségével határoztuk meg. Az eredmények standardizálásához szükséges összfehérje-koncentráció mérését BCA módszerrel végeztük, a májminták hemoglobintartalmát ammóniareagens segítségével határoztuk meg. A májban mért enzimaktivitásokat a hemoglobinnal csökkentett összfehérje-koncentrációra, míg a bendő- és bélnyálkahártya CYP aktivitását az összfehérje-koncentrációra vonatkoztatva standardizáltuk.