A biofilmképzés hatása a kemoterápiás szerekkel szembeni in vitro érzékenységre Pseudomonas aeruginosa törzseknél

Abstract

A Pseudomonas aeruginosa által okozott kórképek – mint az otitis externa és a pyoderma – komoly problémát okoznak az állatgyógyászatban. A bántalmak kezelése napjainkban egyre nehezebb, ugyanis a P. aeruginosa törzsek nagy része multirezisztens. Másrészről a baktérium képes biofilmet képezni, ami nagymértékben csökkenti az érzékenységét. Tanulmányunkban összehasonlítottuk a P. aeruginosa törzsek biofilmjeinek, illetve planktonikus formáinak érzékenységét gentamicinre, kolisztinre és a marbofloxacinra. Meghatároztuk a planktonikus baktériumtörzsek érzékenységét marbofoxacinra, a marbofloxacin-gentamicin és a marbofloxacin-kolisztin kombinációkra. Az érzékenységet a MIC (minimális gátló koncentráció) értékek leolvasásával állapítottuk meg, kutatásunkat a CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute) irányelvei alapján végeztük. Második lépésben a törzseket antibiotikum jelenléte nélkül inkubáltuk, melynek következtében a baktériumok biofilmet képeztek. A biofilmben található P. aeruginosa baktériumtörzsek érzékenységét vitális festéssel (MTS-formazán) vizsgáltuk fotometriás meghatározással. A planktonikus P. aeruginosa törzsek 91,7%-a volt érzékeny marbofloxacinra, míg a hatóanyagok 1:1 arányú kombinációja esetében az összes baktérium érzékenynek bizonyult. A MIC-értékek marbofloxacin használatakor 0,25 és 4 μg/ml, az antibiotikumok 1:1 arányú elegyként történő alkalmazásakor 0,0625 és 1 μg/ml között mozogtak. Marbofloxacin esetében a MIC50 érték 1 μg/ml, a MIC90 2 μg/ml, marbofloxacin:gentamicin kombinációnál 0,5 μg/ml, illetve 1 μg/ml, míg marbofloxacin:kolisztin 1:1 arányú elegyénél 0,0625 μg/ml és 0,5 μg/ml volt. A biofilmet képző törzsek esetében az EC50 (hatékony koncentráció) értékeket vizsgáltuk. Marbofloxacin használatakor ezen értékek 64 és 4096 μg/ml, marbofloxacin:gentamicin kombinációban 8 és 2048 μg/ml, míg marbofloxacin:kolisztin elegynél 8 és 128 μg/ml között változtak. Eredményeink alapján elmondható, hogy a biofilmképzés jelentős mértékben csökkentette a vizsgált P. aeruginosa törzsek érzékenységét bizonyos antibakteriális szerekre. A kísérletünkben használt hatóanyagok kombinációban történő használata hatásosabbnak bizonyult az önálló alkalmazáshoz képest.