A multidrog rezisztencia fehérje-1 (MDR1) immunhisztokémiai és funkcionális vizsgálatának összehasonlítása lymphomás, emlődaganatos és mastosytomás kutyák kórszövettani és áramlástcitometriai vizsgálata alapján

Abstract

A multidrog rezisztencia egyik okaként egy 170kDa molekulasúlyú glikoprotein-t ismerünk meg, amelyet permeability proteinnek, Pgp-nek neveztek el. A kísérletünkben a lymphomás, emlődaganatos és mastocytomás kutyák daganatsejtjeinek membrántranszporter expresszióját, és aktivitását vizsgáltuk. Munkánk során 44 kutya tumor mintát dolgoztunk fel, 29 lymphomás, 11 emlődaganatos és 4 mastocytomás betegét. A sejtekhez adott fluoreszkáló molekula, a calcein-AM festék inkubálás alatt a sejtekbe jut. Ha a sejt rendelkezik a Pgp pumpafehérjével, akkor a calcein-AM-t a sejtek kipumpálják magukból. A FACS vizsgálat során mértük a sejteken belüli fluoreszcenciás aktivitás mértékét. A Pgp-gátlás nélküli, és Pgp-gátlót tartalmazó sejtek eltérő fluorescencia alapján kiszámítható az ún. MAF- (multidrug rezisztencia aktivitási faktor-) érték. Ezek jellemzik a sejtek Pgp funkcióját. A lymphoma esetében pedig immunfenotipizálást is végeztünk így szubtípusokat is el tudtuk különíteni. Az immunhisztokémiai vizsgálatok során a Ki67-es proliferációs markert, a T és B altípusok elkülönítése érdekében CD3, és CD79a markereket, és a Pgp-expresszió meghatározásához a C494-es klónt alkalmaztunk.