Szérum és Intratesztikuláris Tesztoszteron (ITT) koncentrációk mérése kandúrban

Abstract

A szérum és intratesztikuláris tesztoszteron (ITT) koncentrációk mérésére kidolgozott laboratóriumi módszerek a nemi fejlődés és differenciálódás nyomon követésére és a here szaporodás-élettani állapotának jelzésére alkalmasak. A szaporodóképesség kialakulásához, a fiziológiás lefolyású spermatogenesishez meghatározó fontosságú a herék intrauterin, majd postnatális fejlődése. Vizsgálataink célja szteroid hormonok kimutatására irányuló laboratóriumi vizsgálati módszerek kidolgozása, melyek segítségével a szöveti koncentrációk, a különböző szteroid metabolitok egymáshoz viszonyított aránya és a biológiailag aktív hormonok mennyisége meghatározható. Különböző korú egészséges kandúrok heréit ivartalanítás alkalmával távolítottuk el. Az anyaggyűjtés és feldolgozás során figyelembevettük a kandúrok testtömegét és heretömegét, melyekből a gonadoszomatikus index kiszámolható. A bal heréket -20 °C-on, a jobb heréket 8%-os pufferolt formalinban tároltuk feldolgozásig. Az ivartalanítás előtt alvadásban nem gátolt vérmintát vettünk minden egyedből. A fagyasztott herék feldolgozása során a heréket homogenizáltuk. A homogenizátumokat 4000/perces fordulatszámon 20 percig centrifugáltuk. A szérum és here minták tesztoszteron koncentrációját Testosteron ELISA kittel mértük meg. A heréből előkészített mintákból tízszeres, majd négy hígításból álló, futó hígítási sort készítettünk (1:10, 1:20, 1:40, 1:80). A formalinos mintákból hematoxilin-eosinnal festett szövettani metszetek készültek a Kórbonctani Tanszék laboratóriumában. A metszetekben száz kanyarulatos csatornácska átmérőjét megmértük, majd az adatokat statisztikai programmal (Anova) dolgoztuk fel. Eredményeink szerint a hereszövet homogenizátum nyolcvanszoros hígítása szükséges a szöveti tesztoszteron méréséhez. A kandúrban az intratesztikláris tesztoszteronszint (ITT) pozitívan korrelál az életkorral és az ivarérett életkort elérve a here kanyarulatos csatornáit adó csírahám magasságával, az ivarérett (> 8 hónap) életkorban a testtömeg jól korrelál a kanyarulatos csatorna átmérőjével. Az ITT biztosabban jelzi a hereszöveten belüli rendellenességeket, irányítja a fiziológiás spermatogenezist. A testtömeg és a heretömeg mérése prognosztizálhatja a heremorfometria eredményét. A gonadoszomatikus index az egyed nemi fejlettségét mutatja. A házi macskán végzett tanulmányok a veszélyeztetett macskafélék modellezését is szolgálják. A jövőben kutya, macska fajban még nem vizsgált faktorok jelenlétének immunhisztokémiai vizsgálatát és tervezzük a hereszövet hormonszintjével korreláló 50 szérumban mérhető metabolitok kimutatását is. A génmegőrzést célzó vizsgálatok érdekében az invazív hereaspirációk helyett olyan biomarkereket kell keresni, amik az ITT szinttel korrelálnak. A teratospermia gyakoriságának csökkentésére az ITT Sertoli sejtet befolyásoló hatását az androgén hormon receptorok lokalizációján keresztül kell vizsgálni. A kevésbé értékes egyedek szaporodásból történő kizárása érdekében javasolható a macskák fogamzásgátlásának pontosabb kidolgozása, az LH hormon spermatogenezist szabályozó szerepének megismerése is!

The materials for the examination consisted of 27 pairs of testicles from healthy cats of more than 13 month old (5-74 month). Testicles were collected after routine neutering at the owner’s request. Clinical history of cats was recorded. Left testicles were stored at - 20 °C, right testicles were fixed in 8% buffered formalin solution until process. Blood sample was collected from each cat before castration. Samples were centrifuged at 1500/minute for 12 minutes at 4 °C. The supernatant was separated and serum was stored at - 20 °C until measurement. The frozen samples were decapsulated and optional amount of parenchyma tissue was cut out. The samples were measured with analytical scales and it was homogenized with buffered NaCl solution (pH=7,2) in room temperature by tissue homogenisator. Result of homogenisation was 0,1 g parenchyma tissue/ml solution. The homogenisates were centrifuged at 4000/minute for 20 minutes. The supernatant was stored at - 20 °C until process. The samples were diluted tenfold then there were prepared four steps running range of dilution (1:10, 1:20, 1:40, 1:80). The intratesticular and serum testosterone level was measured with Testosterone ELISA. The formalin fixed samples were stained by routine haematoxylin-eosin staining for histomorphological examination. One hundred cross-sections of seminiferous tubules were chosen randomly for each testis, and their diameters and height of germinal epithelia were measured. Statistical differences involving tomcats comparisons were determined by Pearson’s analysis. Result of testicle homogenisatum measurment testosterone level are range of 123,2-9166,4 ng/g. Serum testosterone concentration ranged in 0.00 -10,72 ng/ml. Histomorphological analyses have shown normal distribution after measurement of one hundered tubules diameter and height of germinal epithelium. Means of tubules diameter and height of germinal epithelia differed at the level of significance (p<0,05). Means of tubules diameters are range of 0.105- 0.314 mm. Means of height of germinal epithelia are range of 0,037-0,078 mm. Strong correlation between diameter of seminiferous tubules and height of germinal epithelia. Results of correlation analysis indicate strong relationship between age of cat and intratesticular hormon concentrations as well as between serum and intratesticular hormon levels (p<0,05).