Gyógyszer-metabolizmus vizsgálatok házinyúlban in vitro és in vivo módszerekkel
Absztrakt
A citokróm P450 (CYP450) enzimek számos endogén és exogén vegyület metabolizmusát katalizálják. A CYP1, CYP2 és CYP3 családba tartozó enzimek elsősorban a gyógyszerek és egyéb xenobiotikumok átalakításában vesznek részt. A CYP450 enzimek aktivitásában bekövetkező bármilyen változás befolyásolja a gyógyszermetabolitok keletkezésének mértékét a szervezetben. Ezek a hem tartalmú, endoplazmatikus retikulumhoz kötött enzimek megtalálhatók valamennyi élőlényben, azonban mennyiségük és aktivitásuk jelentős faji különbségeket mutat. A májsejt-tenyészetek kitűnő lehetőséget biztosítanak ezen enzimek működésének tanulmányozására, mivel legnagyobb mennyiségben a májszövetben fordulnak elő. Fontos azonban, hogy az in vitro tesztek eredményei összevethetőek legyenek az élő szervezetben tapasztalt értékekkel.
Vizsgálataink célja, a CYP450 aktivitás meghatározása serkentő- és gátlószerek alkalmazása mellett nyúlban, az in vivo és in vitro körülmények esetén kapott enzimaktivitás értékek összehasonlítása.
A serkentő hatást fenobarbitál, a gátló hatást ketokonazol, valamint alfa-naftoflavon alkalmazásával modelleztük. Vizsgálatunkban 12 új-zélandi fehér nyulat 3 csoportra osztottunk; kezeletlen kontroll, három napon át 80 mg/ttkg fenobarbitált és 40 mg/ttkg ketokonazolt kapó csoportokra. A CYP450 enzimaktivitások meghatározásához valamennyi egyed májából mikroszóma frakciót izoláltunk. Az in vitro kísérleti elrendezésben házinyúlból nyert primer májsejt-tenyészeteket kezeltünk 500 μM fenobarbitállal, 25 μM ketokonazollal és 50 μM alfa-naftoflavonnal, két órán át. A CYP1A1, CYP1A2 és CYP3A6 izoenzimek aktivitását a kemilumineszcencia módszerével mértük.